白癜风哪里好 https://wapjbk.39.net/yiyuanzaixian/bjzkbdfyy/ffxbdf术后认知功能障碍(postoperativecognitivedysfunction，POCD)是麻醉手术后常见的中枢神经系统并发症，表现为记忆力、注意力、信息处理过程及认知灵活性下降等，尤多见于老年患者。POCD严重影响其生活自理能力和生活质量，显著增加家庭与社会经济负担。然而，目前有关POCD的发病机制仍不清楚。p75神经营养因子受体(p75neurotrophinreceptor，p75NTＲ)，是导致众多神经退行性疾病神经行为异常的关键因素。
01实验动物与材料
老年雄性C57BL/6小鼠(18～20月龄)30只，购置于常州卡文斯实验动物有限公司。采用随机数字法分为3组:对照组、手术组及手术+TAT(TAT-Pep5-Calbiochem，p75NTＲ抑制剂)组，每组10只。手术后第6天行条件性恐惧实验，第7天行场景性条件性恐惧实验。行为学训练之前30min腹腔注射TAT(3mg/kg;，Sigma)或等容量生理盐水。
02POCD模型建立
将手术组小鼠置于透明半封闭呼吸环路麻醉箱中，箱外配有含二氧化碳吸附剂的回收装置。小鼠放入麻醉箱内前预充1．5%异氟醚+%O2。待小鼠翻正反射消失后，取右侧卧位，保持呼吸道通畅，谨防误吸，维持麻醉30min。麻醉箱中气体浓度由Vamos持续监测多参数麻醉气体监护仪进行连续监测。手术组小鼠在麻醉后迅速移至手术台，红霉素眼药膏涂抹眼部，将圆锥形面罩固定在小鼠口鼻部。用70%酒精消毒腹部，剪去腹部毛发，70%酒精再次消毒后取腹正中约1．5cm切口。按顺时针方向，依次缓慢探查肠道、肝、脾、肾等腹膜腔脏器，随后将约3cm的部分肠道轻轻外露并用拇指和食指轻轻摩擦约30s，然后将其放回原腹膜腔，保证肠道的方向不发生转变，总探查时间约10min。
03旷场实验
术后第5天行旷场试验测试，旷场实验是用来评估动物的探索行为和焦虑行为。将实验小鼠置于40cm×40cm×40cm的敞箱中心，自由探索5min。使用自动监视系统(XR-XZ;上海欣软信息科技有限公司，上海)记录并分析中央格停留时间和活动总距离。在每次测试结束时，用75%的酒精进行矿场清洁，以消除气味干扰，充分晾干后继续实验。
旷场实验箱，上海欣软
04条件性和场景性恐惧实验
本实验分为训练和测试阶段。术后第6天行条件性和场景性恐惧实验训练，将小鼠置于实验箱(32cm×32cm×45cm)适应3min后，给予30s单频声音刺激(1kHZ，80dB，CS)，然后给予2s足底电击(1mA，US)。24h后将小鼠再次放入同一实验箱中，在不给予任何刺激情况下进行场景测试以评估僵直行为，记录小鼠5min内的僵直(除呼吸运动外无其他任何行为活动的不动状态)时间。场景性恐惧实验结束2h后，改变环境(实验箱底部放入分隔板，四壁粘贴不同形状、颜色塑料板等)，在新场景中测试线索恐惧记忆，行条件性恐惧测试。给予小鼠连续3min和训练时相同的声音刺激(s，70dB，Hz)，同时记录3min内小鼠的僵直时间。使用自动SuperFcs监视系统(XR-XC;上海欣软信息科技有限公司，上海)记录并分析。通过监测小鼠僵直行为时间来评估认知功能障碍，在每次测试结束时，用75%的酒精进行矿场清洁，以消除气味干扰，充分晾干后继续实验。
条件性恐惧实验系统，上海欣软
05Westernblot检测
行为学结束后2h，每组随机选择4只小鼠断颈处死，置于冰上取双侧新鲜海马组织。将海马标本置于添加蛋白酶抑制剂的低温裂解缓冲液中进行裂解，研磨组织，4℃离心(r/min，10min)取上清液。提取上清液后，使用Braford法定量蛋白浓度，95℃煮5min，使蛋白变性。
综上所述，P75NTＲ通过促进神经凋亡等机制介导神经元突触功能异常，进而导致POCD发生。通过阻断P75NTＲ途径，可以有效改善POCD。然而，我们未深入探讨p75NTＲ上调后通过何种机制影响神经因子表达，这有待后续进一步深入的研究。
06文章编号
3-()12--04doi:10．/j．cnki．zfysjjbzz．．
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